突变NPHS2基因在真核细胞中的表达

     （北京）为了通过在真核细胞中表达突变基因，探讨NPHS2基因突变对podocin分子表达和分布的影响。研究者构建分别含有野生型NPHS2编码区cDNA、467-468insT和503G＞A突变NPHS2编码区cDNA的表达载体，分别转染人胚肾细胞(HEK293)后用抗podocin氨基端多克隆抗体(P21)和抗podocin羧基端多克隆抗体(P35)进行免疫荧光染色，在共聚焦显微镜下观察podocin在细胞内的分布。结果与野生型NPHS2编码的podocin分子的表达和分布比较，抗podocin氨基端抗体染色显示，两个突变NPHS2表达的podocin与野生型的一样均为阳性,抗podocin羧基端抗体染色显示503G＞A突变NPHS2表达的podocin与野生型的一样为阳性，而467-468insT突变NPHS2表达的podocin呈阴性。野生型NPHS2表达的podocin不但分布在胞核的周围，而且主要在细胞膜上呈连续性的线状分布，而两个突变NPHS2表达的podocin主要分布在胞核周围。可见NPHS2的467-468insT突变将严重影响podocin的分子结构和在细胞内的正常分布。NPHS2的503G＞A突变即使没有严重影响podocin的结构，但仍然导致podocin不能正常到达细胞膜，因而不能行使正常功能.podocin的正常功能不但有赖于分子结构也有赖于分子分布。/**/