Smad信号传递途径调节肾小管上皮细胞转分化实验

    （南京）为了研究转化生长因子β1(TGF-β)诱导人肾小管上皮细胞(HKC)转分化作用与其细胞内信号传递途径的关系。研究者以细胞间粘连蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)作为肾小管上皮细胞转分化的观察指标，借助细胞培养、蛋白印迹和基因转染等方法，检测TGF-β1引发的Smad信号途径的变化，和TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化作用。将含有Smad 7基因表达质粒转染HKC细胞，观察高表达的Smad 7蛋白对TGF-β1作用的影响。结果实验结果表明①TGF-β1作用HKC细胞10 min即可磷酸化HKC细胞内Smad2/3蛋白，而且此作用可持续48h以上；②TGF-β1作用HKC细胞6h即可下调E-cadherin蛋白的表达，24h后能诱导该细胞表达α-SMA，其作用呈明显的剂量依赖关系；③转染Smad7表达质粒的HKC细胞，可拮抗TGF-β1诱导HKC细胞表达α-SMA以及下调E-cadherin蛋白表达的作用；④应用特异性MAP激酶抑制剂(PD98059和SC68376)和PI3激酶抑制剂(Wortmannin)均不能拮抗TGF-β1的作用。可见TGF-β1诱导的上皮细胞转分化作用是依赖其引发的Smad信号途径，阻断该信号传递途径则能够拮抗TGF-β1的作用。/**/