大鼠角膜碱烧伤后差异表达基因的变化及相应基因克隆

    （哈尔滨）为了探讨大鼠角膜碱烧伤后差异基因表达情况，克隆目的基因片段并了解其同源性，检测有无新基因产生，从分子角度阐明角膜碱烧伤后变性蛋白产生的分子生物学基础。研究者采用异硫氰酸胍法提取大鼠角膜碱烧伤后3 d和2周的角膜RNA，合成双链cDNA。分别以正常角膜和碱烧伤角膜的cDNA为模板，应用2种锚定引物和12种随机引物，进行24种不同引物组合的差异显示反转录聚合酶链反应(DDRT-PCR)，对目的基因进行克隆、克隆鉴定、测序及同源性分析。结果在相同PCR反应条件下，同正常角膜相比，碱烧伤2周的角膜产生1条差异性条带，分子量为630 bp。对该片段进行克隆和测序，并与Gene Bank进行同源性的比较，发现该基因与大鼠线粒体细胞色素C氧化酶的亚单位Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的基因具有部分同源性。可见大鼠碱烧伤2周的角膜有差异基因产生，与大鼠线粒体细胞色素C氧化酶的亚单位Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ具有部分同源性。该差异基因的产生可能与角膜碱烧伤后超氧自由基的作用有关。 /**/