ｅＧＦＰ基因可以用于神经前体细胞体内移植

    湖北华中科技大学同济医学院高峰博士等在近日完成的一项国家自然科学基金课题中发现，增强型绿色荧光蛋白（eGFP）基因可高效转染入永生化大鼠神经前体细胞，并可在细胞中长期稳定的表达和移植。这一研究结果，为eGFP作为良好的示踪标记用于体内移植的研究奠定了坚实基础。

    近年来研究表明，将体外培养的神经前体细胞（NPC）进行体内移植，有望成为神经系统疾病的治疗手段。然而，NPC作为细胞载体携带目的基因移植入人体后，如何在特定的微环境诱导下存活、分裂以至形态分化为与周围宿主细胞相似的细胞等，已成为目前NPC移植研究领域的热点。

    为探讨NPC移植的新思路，高峰博士等研究人员采用体外培养基因转染方法，将重组腺相关病毒（rAAV）载体介导的eGFP基因，转染入大鼠永生化神经前体细胞（INPC）内，通过传代培养、基因转染、抗体鉴定等系列技术处理后，在荧光显微镜下观察检测eGFP在INPC中的表达情况。

    结果发现：转染24小时，神经前体细胞出现绿色荧光蛋白表达，72小时转染率达90%，传代培养8周后，表达绿色荧光蛋白的阳性细胞仍高达70%~75%，细胞生长特性无明显改变。免疫细胞化学检测结果显示，转染的绿色荧光蛋白神经前体细胞抗体抗原染色均为阳性，其在培养基胎牛血清诱导下，可分化为神经元和星形胶质细胞。提示携带eGFP基因可在NPC中长期持续稳定表达，并可作为细胞示踪标记，以观察细胞的增殖、分化等特性。

    据指导该研究的田玉科教授介绍，NPC是一类可分裂增殖、自我更新并具有多分化潜能的细胞，可作为神经细胞的种子细胞，在细胞移植治疗和细胞介导的基因治疗中，具有潜在的临床应用价值。而eGFP是一种优化的突变型绿色荧光蛋白，其荧光比野生型强35倍，具有结构稳定、高效表达、无种系依赖性等特点，更适用于细胞基因表达和蛋白定位检测及细胞示踪标记。本研究表明，eGFP的重组腺相关病毒载体，可高效转染入NPC，并保持了NPC的基本特性。因此，可将eGFP作为一种良好的细胞示踪剂，进行NPC在体内移植的研究。