死亡的肺腺癌A549细胞对树突状细胞成熟的影响

中国医科大学附属第一医院呼吸疾病研究所
温华 康健 郑 锐 侯显明 于润江

树突状细胞（DC）是免疫系统主要的抗原提呈细胞（APC），其在固有免疫反应和适应性免疫方应中均有重要作用。但就肺腺癌而言，其抗原刺激DC 成熟的最佳方式尚不完全清楚。用凋亡（1.33μmol/L 顺铂所致）以及（热休克、反复冻融和5.32μmol/L 顺铂所致）坏死的肺腺癌A549 细胞作为肿瘤相关抗原（TAA），分别刺激人外周血单核细胞来源的DC（mo-DC）。通过比较凋亡和坏死的A549细胞对mo-DC 表型、超微结构和白介素（IL）-12 分泌量的影响，来评估二者对诱导mo-DC 成熟能力的影响。体外诱导DC，并用不同实验条件下所得的TAA 负载于DC；流式细胞术测定DC 表面标志，电镜观察DC 形态和超微结构，ELISA 法测定IL-12 分泌量；流式细胞术和Hoechst 染色判定A549细胞凋亡。

结果显示：

（1）顺铂浓度为1.33μmol/L 时，A549 细胞凋亡率可达19.7%，细胞大多被阻滞在G1 期；顺铂浓度为5.44μmol/L 时，A549 细胞几乎全部死亡。

（2）扫描电镜下可见DC 伸展出大量大小不一的胞质突起，其末端圆钝且细胞膜光滑无皱折。成熟的DC（ mDC）体积大于不成熟的DC（iDC），但表面突起较iDC 减少。

（3）透射电镜下可见DC 的胞体周围有不规则突起和褶皱；胞核染色深，偏向一侧，形状不规则，多为分叶状核内异染色质沿核边高度凝聚；胞质线粒体较为丰富，较多吞饮大泡及小泡。

（4）人DC 特异性表面标志CD1a 为68.7%。不同实验条件（L-DC、H-DC、A-DC 和N-DC）刺激下DC 的表面标志 HLA-DR 分别为6.98%、34.12%、39.49%、19.13%，CD80分别为11.2%、40.55%、54.33%、49.76%。A-DC 的表面标志HLA-DR 显著高于L-DC 和N-DC 的表达（P＜0.01），但与H-DC 表达相近（P＞0.05）；A-DC 与N-DC 表面均高表达CD80，虽然前者略高于后者，但二者间无统计学意义（P＞0.05）。

（5）DC 和L-DC 仅能分泌少量IL-12，其细胞上清浓度低于20 pg/ml；H-DC、N-DC 和A-DC 分泌IL-12 的能力增强，其细胞上清浓度分别为（201.5± 30.3）、（41.2± 5.9）和（289.7± 45.2）pg/ml。N-DC 的 IL-12 分泌量较DC 和L-DC 有增加，H-DC 和A-DC的IL-1 2 分泌量均明显增加，与其余各组间有统计学意义（P＜0 .01），其中尤以A-DC 的IL-12 分泌量最高，与H-DC 间有统计学意义（P＜0 .05）。

结果表明顺铂所致凋亡的A549 细胞能刺激DC成熟。