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腺病毒介导的HBsAg基因修饰树突状细胞瘤苗对HepG2.2

【 2008-05-07 发布 】 临床报道  

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    该项研究目的是研究腺病毒介导的HBsAg基因修饰树突状细胞(DC)体外诱导对HepG2.2.15肝癌细胞特异性的细胞毒效应。方法采用将HBsAg基因亚克隆到pIND和pShuttle载体中,构建重组载体pShuttle-S。将用PI-SceI和I-CeuI双酶切后所获得的HBsAg基因片段与线性化的腺病毒载体pAdeno-X连接,构成腺病毒表达载体AdVHBsAg。经HEK293细胞包装腺病毒后,收获病毒并做滴度测定,再将AdVHBsAg转染人单核细胞来源的DC构建AdVHBsAg-DC肝癌瘤苗。采用Westernblot法鉴定转染基因表达;流式细胞仪检测表面分子;3↑H-胸腺嘧啶核苷(3↑H-TdR)法检测T细胞增殖反应的能力;乳酸脱氢酶(LDH)法检测CTL活性。结果穿梭质粒插入片段为HBsAg基因;包装的腺病毒载体具有良好的感染性,可在HEK293细胞中形成病毒颗粒;HBsAg基因表达于AdVHBsAg-DC中,表明腺病毒介导的HBsAg基因转染的有效性;AdVHBsAg-DC可高表达CD1a、CD11C、CD80、CD86和HLA-DR;AdVHBsAg1DC刺激自体T细胞增殖功能明显高于AdVLacZ-DC组和未转染的DC组(P〈0.05);AdVHBsAg-DC体外诱导CTL能够对表达HBsAg肝癌细胞起到特异性杀伤作用。得出结论,AdVHBsAg可在Dc中表达HBsAg肝癌相关抗原;AdVHBsAg-DC瘤苗可诱导T细胞产生高效的针对HepG2.2.15肝癌细胞的细胞毒效应。/**/
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