腺病毒介导的HBsAg基因修饰树突状细胞瘤苗对HepG2．2

    该项研究目的是研究腺病毒介导的HBsAg基因修饰树突状细胞（DC）体外诱导对HepG2．2．15肝癌细胞特异性的细胞毒效应。方法采用将HBsAg基因亚克隆到pIND和pShuttle载体中，构建重组载体pShuttle-S。将用PI-SceI和I-CeuI双酶切后所获得的HBsAg基因片段与线性化的腺病毒载体pAdeno-X连接，构成腺病毒表达载体AdVHBsAg。经HEK293细胞包装腺病毒后，收获病毒并做滴度测定，再将AdVHBsAg转染人单核细胞来源的DC构建AdVHBsAg-DC肝癌瘤苗。采用Westernblot法鉴定转染基因表达；流式细胞仪检测表面分子；3↑H-胸腺嘧啶核苷（3↑H-TdR）法检测T细胞增殖反应的能力；乳酸脱氢酶（LDH）法检测CTL活性。结果穿梭质粒插入片段为HBsAg基因；包装的腺病毒载体具有良好的感染性，可在HEK293细胞中形成病毒颗粒；HBsAg基因表达于AdVHBsAg-DC中，表明腺病毒介导的HBsAg基因转染的有效性；AdVHBsAg-DC可高表达CD1a、CD11C、CD80、CD86和HLA-DR；AdVHBsAg1DC刺激自体T细胞增殖功能明显高于AdVLacZ-DC组和未转染的DC组（P〈0．05）；AdVHBsAg-DC体外诱导CTL能够对表达HBsAg肝癌细胞起到特异性杀伤作用。得出结论，AdVHBsAg可在Dc中表达HBsAg肝癌相关抗原；AdVHBsAg-DC瘤苗可诱导T细胞产生高效的针对HepG2．2．15肝癌细胞的细胞毒效应。/**/