敲低CD2AP基因表达对足细胞增殖和分裂的影响

    该项研究目的是观察敲低CD2相关蛋白（CD2AP）基因表达对足细胞增殖和分裂的影响。方法采用RPMI 1640培养基,在33℃培养永生化小鼠足细胞系。以PKH-26红色荧光染料标记足细胞后,用Metafectene转染试剂转染针对CD2AP的小分子干扰RNA（siRNA）。转染24 h后以流式细胞仪检测转染效率;48 h后用RT-PCR和Western印迹检测转染后CD2AP mRNA和蛋白表达情况;72 h后以流式细胞仪检测足细胞增殖指数及细胞周期;用Oregon Green 488标记的Paclitaxel直接标记足细胞内的微管蛋白;用激光共聚焦显微镜检测双核及多核足细胞的比例。结果流式细胞仪结果显示,CD2AP特异性siRNA转染效率为66.27%。转染siRNA 48 h后,CD2AP mRNA和蛋白表达分别下降57%和39%。转染72 h后,足细胞增殖指数显著下降（P〈0.05）,G2/M期的细胞数量显著增多（P〈0.05）。共聚焦显微镜下可见转染CD2AP siRNA后,部分细胞有丝分裂后不能分离,双核及多核足细胞的比例显著增加（P〈0.05）。由此得出结论敲低CD2AP基因的表达能阻碍细胞有丝分裂后期的细胞分离,抑制足细胞的增殖能力。/**/