Skp2靶向RNA干扰质粒的构建及其对人舌鳞癌Tca8113细胞有影响

5月7日消息，中国研究者运用了RNA干扰技术阻断人舌鳞状细胞癌Tea8113细胞中Skp2基因的表达，观察Skp2基因沉默后对Tea8113细胞的影响。

研究者采用真核转录质粒pRNAT-U6．1／Neo构建针对Skp2基因的重组转染质粒。经聚乙烯亚胺法将其转染Tea8113细胞，通过反转录聚合酶链反应（reverse transcrip-tase polymerase chain reaction，RT-PCR）、Western blot检测Skp2、p27表达的变化；流式细胞仪、甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl terrazolium，MTT）法检测转染后Tea8113细胞的细胞周期、生长速度的变化。

结果发现转染重组质粒Skp2shRNA-2、Skp2shRNA-3后，Tea8113细胞内Skp2基因在mRNA和蛋白水平上均下调表达（P〈0．01），p27基因蛋白水平上调表达（P〈0．01）；而各重组质粒转染后p27基因的mRNA水平无明显变化。重组质粒Skp2shRNA-2、Skp2shRNA-3转染Tea8113细胞后，与对照组相比，G1～G0期细胞增加了约22％（P〈0．01），G2～M期和S期细胞减少了约10％和12％（P〈0．01），细胞的生长速度明显变慢（P〈0．01）。

由此，研究者得出结论，初步证明了Skp2、p27基因在口腔鳞状细胞癌细胞分化增殖中所扮演的重要角色；筛选出了高效RNA干扰重组质粒Skp2shRNA-2、Skp2shRNA-3，为进一步研究以Skp2基因为靶点的人舌鳞状细胞癌基因治疗奠定了基础。