E-cadherin和CD44V6蛋白在大肠癌患者中表达的临床意义

雷三林  赵华  冯大作  司中洲 (中南大学湘雅二医院　湖南 长沙 410011)

【摘要】目的  探讨E-cadherin和CD44V6在大肠癌患者大肠黏膜组织中的表达及其意义。方法  应用免疫组织化学标记链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶方法，对52例大肠癌患者癌组织中E-cadherin和CD44V6蛋白的表达水平进行了检测。结果  E-cadherin和CD44V6在大肠癌组织中的表达阳性率分别为59.6%和57.7%, E-cadherin和CD44V6的异常表达与大肠癌的浸润深度、淋巴结转移、Dukes分期显著相关(P<0.05)。E-cadherin蛋白高表达者3年生存率为62.3%，而低表达者为37.7% CD44V6蛋白表达阳性者5年生存率为36 .7%，而阴性者为63.3%，阳性表达者与阴性表达者生存率差别有显著性意义(P <0.05)。E-cadherin与CD44V6蛋白的表达阳性率呈负相关(P <0.05)。结论    E-cadherin和CD44V6与大肠癌的进展和淋巴结转移有关，可作为预测肿瘤预后的指标。
【关键词】大肠癌  转移  E-cadherin  蛋白  cd44V6  免疫组织化学
Expression and significance of E-cadherin和CD44V6 in colorectal carcinoma. LEI San-lin ZHAO Hua FENG Da-Zuo ,et al. XiangYa Second Hospital OF The Central South University , Changsha Hunan，410011 China.
【Abstract】 Objective  To investigate the expression and significance of E-cadherin (E-cad)，CD44V6in colorectal carcinoma. Methods E-cad and CD44V6 were detected by streptavidin-biotin immunohistochemical methods in 52 cases of colorectal cancer tissue. Results  The high expression rates of E-cad were 59. 6% and CD44V6 were 43. 8% in colorectal carcinoma tissue. Significant correlation existed among the abnormal expression of E-cad and CD44V6，the depth of tumor invasion，lymphnode metastasis，and Dukes stages(P<0.05). Furthermore，the abnormal expression of CD44V6 was closely associated with the grade of differentiation(P<0.05).There was a positive correlation between the expression of E-cad and CD44V6; The 5 years survival rate of patients with the high expression of E-cad  was 65.6%, those with the low expression  was 28.8%, while there was a significant different with them (p>0 .05). Conclusion  The expression of E-cad and CD44V6 were closely associated with metastasis and development  of the colorectal carcinoma. Detection of the expression of E-cad  and CD44V6 protein in colorectal cancer might served as important prognostic predictors.
【key words】colorectal carcinoma; tumor metastasis; E-cadherin protein; lmmunohistochemistry;
 
　　大肠癌是严重威胁人类健康和生命的常见恶性肿瘤之一。近年来，其发病率明显增加，发病年龄提前。大肠癌的转移是一个十分复杂的过程，涉及到多种因子的异常改变。我们应用免疫组织化学方法，检测黏附分子E-cadherin和CD44V6蛋白在大肠癌患者中的表达，并对其与大肠癌患者临床、病理特征和生存期的关系进行了分析，希望能对临床治疗和随访提供帮助。

1 对象和方法
　　1.1 对象资料  52份大肠癌标本取自1996~2000年间在我院行大肠癌切除术的患者。所有患者术前均未接受过放疗和化疗，均有完整的随访资料。年龄27~86岁，中位年龄53岁，其中男性32例，女性20例。组织学分型:高一中分化腺癌33例，低分化腺癌19，其中黏液腺癌8例;淋巴结转移28例, 无淋巴结转移24例。Duke分期为A 期8例、B期16、C期28例。另取20例正常大肠粘膜活检标本作正常对照。
　　1.2检测方法   采用免疫组织化学标记链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶方法(SP法)检测。S-P试剂盒和鼠抗人CD44V6单克隆抗体2F10(1:70)为ONCOGENE,SCIENCE公司产品，鼠抗人E-Cad单抗(4A2C7)购自北京中山生物技术公司。染色步骤按说明书进行.以PBS代替作阴性对照。以已知阳性片作阳性对照。
　　1.3 染色结果判定方法  由两位病理医师对染色结果作出判定。每张切片随机选取10个高倍视野，每个视野计数100个细胞，取其均值，CD44V6染色主要位于细胞浆及部分细胞核，呈红色弥漫性分布， E-cadherin染色为红色，位于细胞浆及细胞膜，细胞核很少见染色。根据染色强度及显色细胞比例，将染色结果分为－、+、++三级。①按切片中细胞有无显色及深浅评分，无显色为0分、浅红色为1分，深红色为2分。据显色细胞比例评分: 0%～10%为0分，11%～30%为1分，31%～70%为2分，>71%为3分。以上2种评分之和为每例的积分，按积分高低分为:0分为阴性(一)，0～2分为低表达，3～5分为高表达。
　　1.4 统计学方法　采用SPSS10.0统计软件包进行统计学处理，计数资料用x2检验或Fisher’s确切概率法，等级分组资料用秩和检验;生存率之间的比较用Wilcoxon检验。

2 结果
　　2.1 E-cadherin和CD44V6在大肠癌中的表达状况及意义　52例大肠癌中CD44V6表达阳性率57.7%(30/52)。28例转移淋巴结中CD44V6阳性率89.3%(25/28)，其原发瘤中阳性表达为75%(21/28);无转移者为37.5%(9/24)，CD44V6阳性表达在DukesC/D期肿瘤中高于A，B期(P<0.01)，两者间差异有显著性 (P <0.01)。52例大肠癌原发灶中E-cadherin高表达59.6%(31/52)，低表达40.4%(21/52)。在伴淋巴结转移的原发瘤中E-cadherin低表达率为60.7%(17/28)，淋巴结转移灶中低表达率为50％（14/28）而无转移者仅为16.7%(4/24)，DukesC/D期肿瘤的E-cadherin低表达多于A，B期(P <0 .01)，两者间有显著性差异(P <0.01)。(图1、图2)。
　　2.2 不同临床、病理特征大肠癌患者CD44V6和E-cadherin蛋白表达阳性率的比较   52例大肠癌标本中，CD44V6阳性30例，占57.7%; E-cadherin高表达31例，占59.6%。两者的表达呈负相关(P <0.05)(表1)。两者表达阳性率均与患者年龄、性别和肿瘤大小无关(P >0.05)，与肿瘤分化程度、淋巴结转移状况及DUKES分期有关(P <0.05)(表2)
　　2.3 不同CD44V6和E-cadherin蛋白表达状况患者5年生存率比较   CD44V6蛋白表达阳性患者的5年生存率为36.7%(11/30)，CD44V6蛋白表达阴性患者5年生存率为63.6％(14/22); E-cadherin蛋白高表达患者的5年生存率67 .7%(21/31)，低表达患者为42.8%(9/21)，CD44V6阴性、E-cadherin高表达的患者5年生存率均高于CD44V6阳性、E-cadherin低表达表达者，差别有显著性 (P<0.05)

　　　　　

3 讨论
　　E-Cadherin是一种广泛分布于上皮细胞的钙依赖性糖蛋白。主要介导同种细胞间的黏附反应，并起细胞骨架作用。E-Cadherin是调节细胞与细胞间、细胞与基质间黏附反应的重要媒介，对维持组织结构形态起重要作用，因其可通过促进同型细胞间的黏附，使癌细胞间保持密切接触，难以脱离原发灶进入周围组织和脉管，被认为是一个重要的肿瘤转移抑制基因 [1]。 近年来研究证实，E-Cadherin阳性表达的癌细胞的黏附能力强于阴性者，对阴性者E-Cadherin抗体不能产生对其黏附性的影响。E-Cadherin活性减弱可引起细胞与细胞间黏附破坏。而E-Cadherin的过度表达可引起细胞黏附性增强。E-Cadherin表达下降或缺失，细胞间的相互黏附力减弱，造成肿瘤细胞容易分散而向外浸润性生长，脱离原发灶而发生转移[2]。本研究发现E-Cadherin低表达的大肠癌发生淋巴结转移高达60.7%(17/28)，可能是由于E-Cadherin的改变导致肿瘤细胞的运动能力增强这两种因素。说明增殖力强的肿瘤细胞通过E-Cadherin的改变获得转移表型，促使转移形成。与Mayor，Kanazawa等的研究一致[3,4]。但我们发现在转移灶中E-Cadherin的表达与原发灶并不一致，与原发灶相比低表达率下降，这可能与原发灶中肿瘤细胞存在异质性有关，原发肿瘤因E-Cad表达水平下调与肿瘤转移的启动有关，而肿瘤在转移灶需要保持E-Cad高表达，有利于癌细胞相互连接并形成转移灶[4]。CD44是一种细胞表面跨膜糖蛋白，主要负责细胞与细胞间、细胞与基质间的黏附，通过其v区外显子选择性剪接产生多种不同的变异体，其中以含有外显子V6的CD44变异体与肿瘤转移的关系密切，其机理可能通过调节内皮细胞之间以及内皮细胞与细胞外基质之间的黏附和去黏附，而且还可能通过透明质酸作为信号传导分子调控淋巴管新生过程[5,6]。本研究发现CD44表达在Duckes C/D期较A、B期高，有淋巴结转移者较无转移者高，表明CD44V6与大肠癌恶性进展和淋巴结转移有关。
　　肿瘤转移涉及多种相关因子的调控，肿瘤细胞转移相关因子的激活和转移抑制相关因子的失活，均可诱发肿瘤细胞转移表型而导致转移的发生。本研究发现CD44阳性表达和E-Cadherin低表达的大肠癌发生淋巴结转移高达87.5%，可能是由于CD44V6分子介导了肿瘤细胞与淋巴结的特异性受体的粘附及E-Cadherin的改变导致肿瘤细胞的运动能力增强，此外CD44V6有多种生物效应，它的异常表达可扰乱E-Cadherin黏附功能，继而发生癌细胞侵袭[7]。说明增殖力强的肿瘤细胞通过CD44V6和E-Cadherin的改变获得转移表型，促使转移形成。
　　本研究发现E-Cadherin和CD44V6在大肠癌组织的表达呈负相关，E-Cad低表达、CD44V6高表达大肠癌组织分化差、DUKES分期高、淋巴结转移发生率高、患者生存率低，本研究结果提示，E-Cadherin和CD44V6的检测，对大肠癌患者的术式选择、切除范围有指导意义，并可估计大肠癌的预后，为今后开展的基因治疗积累更多的临床资料。

参考文献
[1]  Shiozaki H，Oka H，Lnoue M，et al . E-cadherin mediated adhesio