锤头状核酶降低小鼠胰岛细胞经CD95途径的凋亡

    （武汉）为了研究锤头状核酶通过调控CD95的表达，对小鼠胰岛细胞凋亡的影响,探索提高胰岛移植物存活率的新途径，研究者体外构建针对CD95 mRNA 93位点的锤头状核酶(pU6-Rz93)和突变型核酶(pU6-dRz93)。采用Ⅴ型胶原酶消化法分离小鼠胰岛细胞，通过干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素1α(IL-1α)诱导其高表达CD95后，经钠米载体-Effectene将核酶转染至该细胞。通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹检测(Western blot)法检测胰岛细胞CD95的表达。胰岛细胞经抗CD95的抗体(JO2)作用后，以Caspase-3活性检测试剂盒检测转染前后细胞Caspase-3活性的变化；MTT法测细胞的增殖；Annexin-Ⅴ凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡，并观察了各组细胞对细胞毒T淋巴细胞(CTL)杀伤的反应能力。结果细胞因子可诱导小鼠胰岛细胞高表达CD95分子。转染pU6-Rz93组的胰岛细胞CD95的表达与转染空载体组和转染pU6-dRz93组相比，明显下降。经JO2处理后，转染pU6-Rz93组胰岛细胞的Caspase-3活性和凋亡率明显降低，细胞增殖活性和抵抗CTL杀伤的能力显著增强。可见针对Fas mRNA 93位点的锤头状核酶能显著抑制小鼠胰岛细胞CD95的表达，使其免于CD95途径的凋亡,为提高胰岛移植物的存活率提供了实验基础。 /**/