T1基因表达模式改变对NB4细胞分化的影响

      （苏州）为了探讨WT1基因异构体对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4分化的影响及其分子机制，研究者用电穿孔法将携带WT1基因异构体WTA(-17AA/-KTS)全长cDNA的重组真核表达载体及其对照质粒pCB6+转导NB4细胞，建立WT1基因异构体表达比例改变的单克隆细胞株。通过形态学观察，细胞周期动力学检测，NBT还原试验，细胞表面分化抗原CD11b的检测了解外源性WT1基因异构体WTA在全反式维甲酸(ATRA)诱导下对NB4细胞分化的影响。用RT-PCR检测细胞中PML/RARαt、p21、c-myc基因表达的改变。结果 ATRA处理细胞48 h，对照组(转染空载体的NB4/CMV和未转导WTA的NB4细胞)细胞分化明显，NB4/WTA细胞只出现部分分化。流式细胞术检测NB4/WTA细胞CD11b相对荧光强度(4.63±1.63)低于对照组(8.15±1.84)，ATRA作用24 h后CD11b相对荧光强度(31.42±5.65)与对照组(71.95±9.36)相比差异更为明显。NB4/WTA细胞NBT还原能力较对照组下降，经ATRA处理后两组细胞之间的NBT还原能力的差异更加明显。RT-PCR提示NB4/WTA细胞PML/RARα、p21、c-myc基因的表达较对照组升高。可见增加外源性WT1基因异构体WTA的表达从而将WT1基因异构体表达的比例由+17AA/+KTS优势型转变为-17AA/-KTS优势型能部分抑制ATRA对NB4细胞的诱导分化作用，这可能与PML/RARαt、p21、c-myc基因表达上调有关。/**/