人TIM-3的克隆表达及其单克隆抗体的制备

    （武汉）为了构建人TIM-3融合蛋白原核表达载体，获取蛋白质抗原，制备抗人TIM-3单克隆抗体。研究者通过特异性引物从人外周血单个核细胞中扩增出hTIM-3 cDNA，细胞膜外基因克隆到原核表达载体pQE100S中，转化到E.coli BL21(DE3)，表达并纯化带6个组氨酸的融合蛋白，免疫BALB/c小鼠，应用杂交瘤技术经克隆筛选获得抗人TIM-3单抗的杂交瘤细胞株，以间接酶链反应吸附测定(ELISA)和Western Blot等方法进行单克隆抗体的鉴定。结果人TIM-3 cDNA经DNA测序得到证实，成功构建了pQE100S-hTIM-3原核表达载体，表达并纯化了大量蛋白质抗原，获得了1株稳定分泌抗人TIM-3单抗的杂交瘤细胞株(28H12)，Western Blot分析证明hTIM-3蛋白在转染的CHO细胞中高表达。可见成功构建了人TIM-3融合蛋白原核表达载体，表达并纯化了6×His-hTIM-3融合蛋白，所获单抗能特异识别人TIM-3蛋白，为进一步研究人TIM-3及其配体的功能提供了条件。/**/