利用体内噬菌体展示技术筛选肝癌组织特异性结合肽

    （上海）为了筛选人源肝癌组织特异性结合短肽。研究者体外培养人源肝癌细胞株BEL-7402，建立荷瘤裸鼠模型。尾静脉注射噬菌体12肽文库至荷瘤裸鼠体内，循环20 min后回收肿瘤组织中噬菌体，同时取正常对照组织进行噬菌体效价测定和免疫组化观察。将回收的噬菌体扩增、纯化，并以此作为起始物进行下一轮筛选。经过3轮体内筛选，得到与肝癌组织或细胞特异结合的肽段。随机挑选噬菌体单克隆进行测序，分析序列同源性后进行体外细胞酶联免疫吸附试验(ELISA)和体内回输实验，验证噬菌体克隆的导向性。结果经过3轮体内筛选，瘤组织中噬菌体的回收率逐步提高，回收量随着输入量的增加迅速增加，而每轮筛选肝组织中的噬菌体回收量始终保持在一个恒定范围，并不随输入量的增加而增加。免疫组化结果显示，第3轮筛选后，瘤组织中的噬菌体得到高水平富集，同时其他组织的非特异性结合降至最低。肝癌细胞特异性结合最强的是A54号单克隆，A67、B2号单克隆次之。B2的导向效果最好，A54次之。通过对噬菌体单克隆的序列分析，初步确定了PSS/PTT基序。可见利用体内噬菌体展示技术，可以成功筛选到与肝癌细胞或组织特异结合的噬菌体肽。/**/