短发卡RNA对人黑素瘤细胞BRAF基因的沉默作用

    （南京）为了构建BRAF基因序列特异性的短发卡RNA(shRNA)质粒载体，检测其对人黑素瘤细胞BRAF基因的干扰作用。研究者设计2条BRAF基因序列特异性的shRNA编码序列和1条非特异性阴性对照序列，插入质粒pGenesil-1，双酶切和测序鉴定。用构建成功的3条质粒转染人黑素瘤细胞株A375和M14，分别采用RT-PCR和蛋白印迹检测其BRAF基因的mRNA和蛋白表达。结果 所设计的shRNA序列被正确插入质粒pGenesil-1。非特异性对照质粒neg对黑素瘤细胞BRAF基因表达不产生干扰，2条序列特异性质粒braf 1和braf2抑制了BRAF基因mRNA和蛋白的表达，其中braf 1干扰效果最为明显，最高抑制率可达90%。可见 质粒介导的shRNA可成功干扰人黑素瘤细胞BRAF基因的表达，其抑制时间可持续至少1个月。/**/