乙酰肝素酶-siRNA表达载体的构建及其抑制黑素瘤细胞株体外

    该项研究目的是构建针对人乙酰肝素酶（HPSE）基因的小干扰RNA（siRNA）及其表达载体，观察其对A375细胞HPSE基因的干扰作用及其对肿瘤细胞体外侵袭的抑制作用。方法采用设计并构建了重组质粒pRNATU6．1／HPSE―siRNA，转染A375细胞，用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法分别测定HPSE基因RNA和蛋白水平的表达变化，Matrigel侵袭实验观察A375细胞体外侵袭能力的改变。结果将针对HPSE基因的siRNA的双链寡核苷酸片段正确克隆到pRNATU6．1载体；转染A375细胞，与对照组比较，HPSE―siRNA组HPSE基因和蛋白的表达均明显降低。转染后肿瘤细胞的体外侵袭能力与对照组相比受到明显抑制。由此得出结论，成功构建了针对HPSE基因的siRNA载体，HPSE―siRNA转染A375细胞可以显著降低细胞HPSE基因和蛋白的表达。/**/