金钱草总黄酮提取物的抗血栓作用研究

  目的:观察金钱草总黄酮提取物对大鼠体内血栓形成和血小板凝聚率的影响。方法:制造大鼠体内静脉血栓形成模型，观察血栓湿重;采用ADP诱导的大鼠血小板凝聚，测定血小板在不同时间的聚集率以及最大聚集率。结果:金钱草总黄酮提取物30、20mg.kg组均不同程度地抑制大鼠体内静脉血栓的形成，减轻血栓湿重和干重;抑制由ADP诱导的大鼠血小板不同时间点的聚集率和最大聚集率。结论:金钱草总黄酮提取物可明显对抗血栓的形成，并且有明显地降低血小板聚集率的作用。

【关键词】  金钱草总黄酮;抗血栓;血小板聚集;小鼠

　金钱草为报春科植物过路黄（Lysinmachia christi-nae Hance）的干燥全草，别名“活血丹”，主要化学成分为黄酮类，包括:槲皮素（quercetin），槲皮素-3-0-葡萄糖甙，山柰素（kaempferol）及山柰酚等。近年来研究表明，金钱草总黄酮能明显改善心肌营养性血流，减轻心肌缺血及损伤，与潘生丁作用相似。本实验通过测定体内血栓重量和血小板凝集率来探索其抗血栓的作用机理，为开发和应用防治血栓性疾病的药物提供一定的科学依据。
    
　　1 对大鼠体内血栓形成的影响
    
　　1.1 实验方法

　　选用Waster大鼠50只，体重200～250g，雌雄各半，由长春高新技术医学动物实验研究中心提供，随机分为空白对照组、阳性对照组、金钱草总黄酮高、中、低剂量5组，每组10只。金钱草总黄酮（长春中医药大学第一附属医院新药中心提供），刺五加注射液（批号:20051012，黑龙江省完达山制药厂），3%戊巴比妥钠，1.10000微量电子天平（FA1001，上海天平仪器厂）。所有动物静脉注射给药，每日1次。给药剂量:金钱草总黄酮高、中、低剂量30、20、10mg.kg体重;阳性对照组（刺五加注射液）:80mg.kg体重;对照组给予同等剂量的蒸馏水。连续给药7d。末次给药后30min，大鼠以3%戊巴比妥钠腹腔给药麻醉。腹部正中切口切开腹腔，剥离下腔静脉，与左肾静脉下方用粗线结扎下腔静脉，缝合腹腔，结扎4h后，处死大鼠，打开腹腔，在结扎下方2cm处夹闭管腔，取出瘀血段血管，剖开管腔，取出血栓，放在滤纸上，吸干血液，用微量电子天平称取血栓湿重（mg），然后将血栓在室温下放置24h，称取血栓干重（mg）。

    统计学处理:各组实验数据以均数加减标准差表示，组间差异的显著性检验用t检验。

　　1.2 实验结果

　　见表1。表1 各组大鼠静脉血栓湿重干重比较（略）
    
　　结果表明，金钱草总黄酮高剂量组和中剂量组及阳性对照组的湿重和干重与空白对照组比较均有显著性差异（P<0.05，P<0.01），低剂量组与对照组比较未见显著性差异（P>0.05），提示金钱草总黄酮对大鼠体内血栓模型动物的血栓形成有明显的抑制作用。 2 对大鼠血小板聚集率的影响
    
　　2.1 实验方法
    
　　［1］选用Waster大鼠50只，体重200～250g雌雄各半，由长春高新技术医学动物实验中心提供，随机分为空白对照组、阳性对照组、金钱草总黄酮高、中、低剂量5组，每组10只。金钱草总黄酮（长春中医药大学第一附属医院新药中心提供），刺五加注射液（批号:200510012，黑龙江省完达山制药厂），3.8%枸缘酸钠，ADP（美国Simga公司产品），PH7.4的磷酸盐缓冲液，离心机（LDZ2.北京医用离心机厂），1.10000微量电子天平（FA1004，上海天平仪器厂），多功能智能血液凝聚仪TY XN-96（上海通用机电技术研究所）。大鼠乙醚麻醉下，腹腔主动脉取血，3.8%枸椽酸钠抗凝。1000r.min，离心5min，取富含血小板血浆（PRP）备用。血小板促凝剂的准备:用1.1000天平精确称取ADP5mg，用PH7.4的0.2M磷酸盐缓冲液溶解，最终配制成浓度为2um。金钱草总黄酮实验分别配制成4、2、1mg.ml，超声震荡充分溶解，用双层滤纸过滤。滤液再用0.45μm微孔滤膜抽滤，备用。血液凝集仪的准备:将TYXN-96智能型血液凝集仪按实验操作步骤，取富含血小板血浆100μl，加入试验测药10μl（分别含金钱草总黄酮4、2、1mg.ml），对照组加同体积生理盐水。测试时再加入促凝剂ADP11μl。观测血小板聚集曲线变化:每组测试10例，分别计算各级1、5min（PAG-1，PAG-5）的血小板聚集率及血小板聚集性最大峰值（PAG-M）。

    统计学方法:实验数据以均数加减标准差表示，组间差异的显著性检验用t检验。

　　2.2 实验结果

　　见表2。 表2 各组血小板聚集性的比较（略）
      
　　结果表明，与对照组比较，金钱草总黄酮体外4、2mg.ml在3、5min测试点上血小板聚集率明显小于对照组，血小板聚集最大聚集率也明显小于对照组，提示一定剂量的金钱草总黄酮体外给药对ADP所致的血小板聚集均有一定的抑制作用。
    
　　3 讨论
    
　　血栓的形成涉及到机体的凝血功能、血小板凝聚功能等多种因素，由其引起栓塞和缺血是许多心血管疾病发生的重要病理基础。如能有效地控制血栓的形成并能降低血小板凝聚率，对防治缺血性心脑血管疾病有着深远的意义［2、3］。

    本实验通过测定体内静脉血栓的重量观察金钱草总黄酮对于血栓形成的抑制作用，证明了金钱草总黄酮能显著减轻病理状态下大鼠体内静脉血栓形成的湿重和干重，降低血栓形成的百分率，显示出显著的血栓抑制作用，而且这种抗血栓作用部分是通过抑制ADP诱导的血小板凝聚功能而实现的［4、5］。这一结果也显示了金钱草总黄酮的抗血栓，活血化瘀功效是具有一定的理论基础，为开发和应用防治血栓性疾病的药物提供一定的科学依据。