1型糖尿病免疫治疗研究进展

     本届ADA年会特邀多位免疫治疗学专家就几种能够有效维持1型糖尿病患者β细胞功能的免疫疗法进行了广泛交流。现就相关内容作一简要介绍。  输注自体脐带血:改变1型糖尿病进程  在观察到输注自体脐带血可延长1型糖尿病患儿“蜜月期”的基础上,美国佛罗里达医学院小儿内分泌学研究者对7例2至7岁新近诊断为1型糖尿病的患儿进行了自体脐带血输注治疗,并随机选取13例年龄和病程相匹配、仅接受胰岛素强化治疗的1型糖尿病患儿作为对照。治疗6个月后的结果表明,与胰岛素治疗组相比,脐带血输注组的平均糖化血红蛋白(HbA1c)水平(P=0.0031)和每日胰岛素需求总量(P<0.0001)均较低,且平均血清C肽水平有所升高。治疗中没有观察到输血带来的不良反应。  该研究的主要负责人Schatz博士就这一现象的可能机制进行了分析。他指出,调节性T细胞(Treg)在免疫调节中发挥了关键作用,它们可以抑制效应性T细胞(Teff)对自身和非自身抗原的反应活性,是维持外周免疫耐受的必需因子。而脐带血富含Treg,输注脐带血治疗6个月后检测到患儿血液中Treg细胞数量增多。血糖水平的改善似乎和输注这些脐带血细胞有关。

    然而,此项研究还没有明确这种益处可以持续多长时间,研究者会对这些患儿进行长期随访。  该研究的报告者Haller博士认为,恢复免疫耐受性是自身免疫研究的核心,并有可能延缓甚至中止糖尿病的进展。输注脐带血就像是提供了一种药物,其中的免疫细胞(Treg)可能保护胰腺免受免疫系统的攻击。通过使用Treg加上小量免疫抑制剂或其他免疫调节药物或附加细胞治疗来改变1型糖尿病的进程,称作“鸡尾酒”疗法,该疗法在某种意义上与HIV和癌症的突破性治疗类似。下一步的研究目标是明确该治疗带来益处的原因,这将有助于我们将来能够分离和培养某些细胞来对大规模人群进行治疗,而不仅仅是对那些储存了脐带血的患者,毕竟每个人都保存脐带血是很难实施的。  此外,美国明尼苏达儿童血液和骨髓移植中心Blazer博士认为,与成人血细胞相比,脐带血Treg是更好的来源,因为这些T细胞具有更强的免疫耐受能力。脐带血CD4+CD25+Treg易于纯化,因此应用1型糖尿病患者脐带血Treg来维持β细胞的功能具有较大潜力。  IL-2Rα单克隆抗体治疗:延缓1型糖尿病进展  美国印第安纳波利斯Rodriguez博士报告了在常规治疗基础上加用免疫抑制药物daclizumab来阻止1型糖尿病发展的研究结果。daclizumab是一种人源化抗白介素-2受体α(IL-2Rα)的单克隆抗体。该研究纳入34例3个月内确诊为1型糖尿病的患者。结果显示,与常规治疗相比,加用免疫抑制药物daclizumab可明显增加患者血清C肽水平,减少外源胰岛素的需要量,降低HbA1c水平并维持一段时间。Rodriguez博士认为,加用daclizumab是安全有效的,该药有望作为1型糖尿病患者长期治疗或诱导治疗的有效方法之一。 

    重组人GAD65抗原治疗:维持1型糖尿病患者的β细胞功能  瑞典学者Casa等的先期研究已表明,谷氨酸脱羧酶65(GAD65)免疫干预能够阻止非肥胖糖尿病(NOD)小鼠发生糖尿病。在此基础上,Casa再次报道了临床应用重组人GAD65(Diamyd)治疗可有效维持成人隐匿性自身免疫性糖尿病(LADA)和儿童1型糖尿病患者的β细胞功能。该项随机、双盲、安慰剂对照的多中心研究共筛选出70例10~18岁新诊断为1型糖尿病的患儿(女42例,男28例),这些患儿空腹C肽水平高于0.1 nmol/L,GAD65自身抗体为阳性。研究者将其随机分入Diamyd组(20 μg注射1次,4周后再强化注射1次)或安慰剂组,并以12名年龄、性别相匹配的健康儿童作为对照组,治疗前后应用标准混合餐试验测定血清C肽水平来评估β细胞的功能,同时收集外周血单核细胞,使用流式细胞仪检测表达Neuropilin/CTLA-4的Treg数量。  结果显示,治疗前安慰剂组和Diamyd组表达Neuropilin/CTLA-4的Treg百分比相近,且均显著高于对照组(P=0.01)。在第一次注射治疗3个月后,安慰剂组表达Neuropilin/CTLA-4的Treg细胞百分比高于Diamyd组(P=0.01),Diamyd组Treg百分比下降到与对照组相近的水平。相似的差异还表现在CD25+和CD4+淋巴细胞的细胞密度中位数上(P=0.01)。

    该结果提示,GAD治疗能使1型糖尿病患儿循环中的Teff恢复并维持在健康对照水平,通过抑制Teff、诱导免疫耐受来维持胰腺β细胞功能。  转导GAD65至造血干细胞:诱导自身抗原特异性免疫耐受  通过转基因小鼠过表达胰岛素自身抗原,可以预防NOD小鼠发生1型糖尿病。美国波士顿Jaeckel博士通过研究尝试将自身抗原基因用逆转录病毒转移至造血干细胞(HSC)来实现这一诱导耐受。由于在NOD小鼠中抗GAD的T细胞更易检测,故研究者应用GAD65作为自身抗原,构建表达GAD的逆转录病毒,使其通过抗原呈递细胞得到最佳表达;并用增强型绿色荧光蛋白(eGFP)进行修饰,以仅表达eGFP的逆转录病毒作为对照。  结果显示,转导GAD后,小鼠骨髓表现出长期的、多谱系的造血嵌合现象(hematopoetic chimerism)。仅接受eGFP转导造血干细胞的小鼠表现出较强的抗GAD及其抗原决定簇的T细胞反应,而接受GAD转导造血干细胞的小鼠表现为完全耐受。在GAD转导的造血干细胞中,仅5%的嵌合现象就足以诱导GAD特异性耐受。然而,对GAD完全耐受的小鼠仍可发生1型糖尿病,其动力学和发病率与仅接受eGFP转导造血干细胞的小鼠相同,再次证明GAD65不是NOD小鼠的重要自身抗原。  该结果首次证实了用逆转录病毒将自身抗原转导至造血干细胞可导致T细胞完全耐受。表明利用其他自身抗原,使用同样方法,在1型糖尿病的治疗上具有巨大潜力。同时,这一模型无需建立转基因动物即可检测潜在抗原的重要性。 

    来自美国芝加哥西北大学的Miller博士报告了应用抗原特异方法治疗自身免疫性疾病的进展,他们发现通过注射混有乙烯碳化二亚胺的多肽脾抗原呈递细胞可在CD4+T细胞中诱导特异性无应答反应,从而阻止和治疗多种自身免疫疾病。Miller博士及同事已完成了大部分对大鼠多发性硬化病的研究,目前正以接受同种异基因胰岛移植的糖尿病大鼠为对象研究抗原特异治疗的效果。