研究者探讨人前列腺特异性抗原启动子调控的CXCR4-siRNA逆转录病毒载体的构建及其对前列腺癌细胞

7月17日消息，中国研究者构建人前列腺特异性抗原（hPSA）启动子调控的趋化因子受体4（CXCR4）的RNA干扰逆转录病毒载体，并探讨其对激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞CXCR4基因表达的靶向抑制作用。

研究者通过PCR扩增CXCR4特异性小干扰RNA（siRNA），转入带有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）和启动子u6的pGensil-1质粒，以hPSA启动子代替U6启动子，再将重组基因片段导入到逆转录病毒真核表达载体pLXSN中，进行限制性酶切鉴定。转染PA317包装细胞，收获病毒上清，分别转染前列腺癌细胞PC-3m、LNCaP和人乳腺癌细胞MCF7。采用RT-PCR、Westernblot检测CXCR4基因表达。Transwell小室侵袭实验检测前列腺癌细胞体外侵袭能力的变化。

结果发现通过限制性酶切鉴定该重组质粒，成功构建了CXCR4的RNA干扰质粒pLXSN／EGFP—hPSA-siCXCR4。与空载体组比较，CXCR4-siRNA对LNCaP细胞CXCR4mRNA和蛋白表达抑制显著，48h抑制率分别为（81．53±10．22）％和（90．52±9．31）％；对PC-3m、MCF-7细胞CXCR4mRNA和蛋白表达无抑制作用。Transwell侵袭实验结果显示，LNCaP细胞干扰组微膜下孔细胞数为（139．9±14．2）个，空载体组为（348．4±36．4）个，两组差异有统计学意义（P〈0．05）；PC-3m、MCF-7细胞干扰组微膜下孔细胞数与空载体组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。

由此，研究者得出结论，该逆转录病毒系统中，hPSA启动子调控的下游RNA干扰序列特异性地抑制激素依赖前列腺肿瘤细胞的CXCR4基因表达，具有明显的靶向性。hPSA启动子调控的靶向CXCR4基因的RNA干扰技术在激素依赖性前列腺癌的基因治疗中具有一定价值。