抑制视网膜母细胞瘤细胞的血管内皮生长因子表达

    VEGF shRNA表达质粒稳定转染可高效抑制RB细胞中VEGF的表达，靶向VEGF的RNA干扰可作为拮抗VEGF并治疗RB的有效手段。 视网膜母细胞瘤是婴幼儿最常见的眼内恶性肿瘤，有遗传型和不遗传型，愈后极差。 中华眼科杂志6月第6期刊登一项研究，研究者构建VEGF shRNA表达质粒p4．1CMV―VEGF shRNA，以脂质体介导其转染两种RB细胞系SO―RB50和HXO―RB44，新霉素筛选结合梯度稀释法获得p4．1CMV―VEGF shRNA阳性RB细胞单克隆，继续培养扩增建立p4．1CMV―VEGF shRNA阳性RB细胞，用荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测RB细胞中VEGF基因的表达，并用酶联免疫吸附（ELISA）法检测RB细胞上清中VEGF蛋白的表达；以与哺乳动物基因组无同源性的shRNA表达质粒p4．1CMV―Neg shRNA作为阴性对照，同时以未做任何处理组作为空白对照。探讨血管内皮生长因子（VEGF）短发夹RNA（shRNA）表达质粒稳定转染对视网膜母细胞瘤（RB）细胞中VEGF表达的作用。

    上海交通大学医学院附属第九人民医院眼科贾仁兵等研究人员研究显示成功构建p4．1CMV―VEGF shRNA并获得其表达阳性的RB细胞克隆。阴性对照组和空白对照组SO-RB50细胞的VEGF基因表达量分别为实验组的5．02倍和6．32倍；阴性对照组和空白对照组HXO―RB44细胞分别为实验组的5．70倍和4．86倍。实验组SO―RB50细胞上清中，VEGF蛋白浓度为（187．69±83．89）μg/L，显著低于阴性对照组（822．98±187．98）μg/L和空白对照组（865．76±170．33）μg／L，差异有统计学意义（均P〈0．01）；实验组HXO―RB44细胞上清中，VEGF蛋白浓度为（162．20±66．33）μg／L，与阴性对照组（764．33±164．79）μg／L和空白对照组（828．22±145．94）μg／L比较，差异也有统计学意义（均P〈0．01）。 因此可见VEGF shRNA表达质粒稳定转染可高效抑制RB细胞中VEGF的表达，靶向VEGF的RNA干扰可作为拮抗VEGF并治疗RB的有效手段。