乙型肝炎病毒前S1蛋白反式激活基因5在酵母细胞中的表达

    该项研究目的是在真核生物酵母细胞中表达乙型肝炎病毒前S1蛋白反式激活基因5（PS1TP5）。方法采用以HepG2细胞来源的mRNA为模板，经RT-PCR法扩增PS1TP5基因，克隆到pGEM-T载体中，并测序鉴定，酶切回收后连接到酵母表达质粒pGBKT7中，并转化酵母AH109，色氨酸缺陷型培养基（SD／-Trp）上筛选阳性菌落，提取酵母蛋白质，进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS―PAGE）和Western免疫印迹分析，以明确PS1TP5是否可在其中表达。结果成功扩增出PS1TP5，测序鉴定符合基因库报告序列，酶切回收的PS1TP5基因片段成功克隆人酵母表达载体pGBKT7，并转化人酵母细胞AH109中，Western免疫印迹显示该基因在酵母细胞中成功表达，表达产物相对分子质量为36950。由此得出结论成功构建了PS1TP5酵母表达载体，并在酵母细胞中表达。/**/