重组起搏基因质粒构建生物起搏器的实验研究

    （武汉）为了研究旨在构建重组起搏基因质粒pIRES2-EGFP-HCN2，并检测其在体外心房肌细胞及犬病态窦房结综合征(病窦)模型体内的表达。研究者对含mHCN2 cDNA 的PTR 载体进行转化和扩增，将所得mHCN2 基因定向克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中，进行双酶切来鉴定克隆的正确性。将重组质粒用电穿孔法转染心房肌细胞，同时直接注射至犬病窦模型的窦房结区域，体表心电图监测犬窦房结功能改善情况，并通过荧光显微镜及RT-PCR检测重组质粒pIRES2-EGFP-HCN2在体内外的表达。而对照组仅注射生理盐水。结果 构建了重组质粒pIRES2-EGFP-HCN2。荧光显微镜下可见转染后的心房肌细胞呈绿色荧光，其搏动频率较未转染的细胞明显增快[(180±11)次/min 与 (140±14)次/ min，P＜0.05]。注射组织的冰冻切片显示绿色荧光蛋白，RT-PCR显示了mHCN2基因片段，体表心电图显示犬窦房结功能改善[(150±13)次/ min 与(105±17)次/ min，P＜0.05]。而对照组始终未见到绿色荧光蛋白表达及窦房结功能改善。可见 成功构建了重组质粒pIRES2-EGFP-HCN2，并在体外心房肌细胞及犬病窦模型体内成功表达，为生物起搏的研究奠定基础。/**/