不同RNA干预技术对人乳头瘤病毒的沉默作用

    siRNA及shRNA表达载体均可在体外安全高效地沉默HPV11E7基因的表达，其干预作用存在一定的量效性和时效性，且可能存在最佳作用浓度（剂量）和最佳作用时间。 RNA干预是指一些小的双链RNA可以高效、特异的阻断体内特定基因表达，促使mRNA降解，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型。 中华皮肤科杂志5月第5期刊登一项研究，研究者化学合成1对小片段干扰RNA（siRNA-11E7）、同时构建3个短发夹状小RNA（shRNA）表达质粒（pRNAT-11E71^#、2^#、3^#），分别转染稳定表达HPV11E7的C57BL／6小鼠黑素瘤细胞系B16细胞株，采用实时荧光定量PCR技术检测细胞转染前后靶基因mRNA的表达水平。探讨RNA干预技术的两种形式在体外对人乳头瘤病毒（HPV）11型E7基因的沉默作用。

    浙江大学医学院附属邵逸夫医院皮肤科陈贤祯等研究人员研究显示siRNA-11E7转染细胞后6、12、24、48、72、96、120h对靶基因表达的抑制率分别为12.60％、31.41％、41.93％、42.93％、74．35％、32.71％、29．00％；最佳作用浓度为25nmol／L（抑制率70.06％），最低作用浓度可至3.13nmol／L（抑制率47.00％）。以0．4μg pRNAT-11E71^#、2^#、3^#及上述3个质粒等量混合转染细胞72h后对靶基因表达的抑制率分别达44．52％、59．26％、89.62％、54.09％，阴性质粒无干预作用。pRNAT-11E73^#作用6、12、24、48、72、96、120h对靶基因表达抑制率分别为0、17．50％、40．90％、42．40％、61．90％、51．50％、0％；最佳作用剂量0．2μg。 因此可见siRNA及shRNA表达载体均可在体外安全高效地沉默HPV11E7基因的表达，其干预作用存在一定的量效性和时效性，且可能存在最佳作用浓度（剂量）和最佳作用时间。